Введение
Известно, что на сегодняшний день патология щитовидной железы (ЩЖ) гипотиреоз (ГПТ) является наиболее часто встречаемым и наиболее изученным синдромом в эндокринологии. Однако, в диагностике и лечении этого состояния остается много вопросов, не имеющих однозначной трактовки [1]. Субклиническим ГПТ (СГПТ) обозначается лёгкая недостаточность ЩЖ, при которой определяется изолированное повышение уровня тиреотропного гормона гипофиза (ТТГ) при нормальном уровне свободного тироксина (Т4) в крови [2]. Известно, что функция ЩЖ регулируется преимущественно ТТГ – гликопротеином, выделяемым гипофизом [3]. В коррекции соматических и нейрогенных нарушений важна роль холиновых эфиров N-замещённых-α, β-дегидроаминокислот (ХЭА), заслуживающих существенного внимания с точки зрения особенностей их синтеза и биологической активности [4].
Вместе с тем продолжают отсутствовать сведения относительно применения СМД ХЭА, в частности, использованных в данном исследовании, холинового эфира N-(4-бромбензоил)-α, β-дегидрофенилаланина (ХБФ), холинового эфира N-(2- метоксибензоил)-О-изопропил-α, β-дегидротирозина (ХБД), в изучении изменения концентрации ТТГ в сыворотке крови у крыс при СГПТ. В данном научном исследовании, исходя из вышесказанного, исследовано изолированное действие СМД ХЭА – ХБФ и ХБД (10-13 и 10-17 М) на изменение концентрации ТТГ в сыворотке крови у гипотиреоидных крыс посредством метода иммуноферментного анализа (ИФА).
Материал и методы
Исследования проведены на 170 пятнадцатимесячных крысах-самцах (линия Вистар). СГПТ вызывался путём проведения тиреоидэктомии (ТЭК), согласно методике, указанной в наших предыдущих работах [5, 6].
Животные были разделены на следующие 6 подопытных групп: 1) интактные животные – 20 экземпляров; 2) контрольные животные с СГПТ – 30 экземпляров; 3) животные с СГПТ, получавшие внутримышечные инъекции ХБФ в СМД 10-13 М в течение 14 дней после ТЭК – 30 экземпляров; 4) животные с СГПТ, получавшие внутримышечные инъекции ХБФ в СМД 10-17 М в течение 14 дней после ТЭК – 30 экземпляров; 5) животные с СГПТ, получавшие внутримышечные инъекции ХБД в СМД 10-13 М в течение 14 дней после ТЭК – 30 экземпляров; 6) животные с СГПТ, получавшие внутримышечные инъекции ХБФ в СМД 10-17 М в течение 14 дней после ТЭК – 30 экземпляров. В сыворотке крови с помощью метода ИФА определялась концентрация ТТГ посредством иммуноферментного анализатора RISER 8793. В данных сериях исследований принцип работы набора заключался в том, что определение уровня ТТГ основано на использовании конкурентного варианта твердофазного ИФА. На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизованы машинные моноклональные антитела к ТТГ. В лунке планшета вносят исследуемый образец и конъюгат (Т4, конъюгированный с пероксидазой). Во время инкубации ТТГ образца конкурирует с конъюгированным ТТГ за связывание с антителами на поверхности лунки. В результате образуется связанный с пластиком «сэндвич», содержащий пероксидазу. Во время инкубации с раствором субстрата тетраметилбензидина происходит окрашивание растворов в лунках. Интенсивность окраски обратно пропорциональна концентрации ТТГ в исследуемом образце. Концентрацию ТТГ в исследуемых образцах определяют по калибровочному графику зависимости оптической плотности от содержания ТТГ в калибровочных пробах. Статистическая обработка результатов производилась с использованием t-критерия Стьюдента. Исследование было одобрено Институциональным комитетом по биоэтике и соответствует принципам Руководства по уходу и использованию лабораторных животных, изданного US NIH» (№ 85-23, пересмотрено в 1985 г.).
Результаты и обсуждение
В данных сериях исследований у крыс с CГПТ происходило повышение содержания уровня ТТГ в сыворотке крови на 528, 5 % по сравнению с его исходным уровнем, принятым за 100 %. После двухнедельного воздействия СМД ХБФ 10-13 М у пятнадцатимесячных крыс с СГПТ в сыворотке крови отмечалось: понижение содержания ТТГ до 116, 7 %, по сравнению с животными с СГПТ, не получавших данной СМД ХБФ. В следующей серии исследований у крыс с СГПТ происходило повышение содержания уровня ТТГ в сыворотке крови на 499, 2 % по сравнению с их исходными уровнями. После двухнедельного воздействия СМД ХБФ 10-17 М у крыс с СГПТ в сыворотке крови отмечалось: понижение содержания ТТГ до 98, 7 %, по сравнению с животными с СГПТ, не получавших данной СМД ХБФ. Можно отметить, что в данных сериях исследований действия СМД ХЭ 10-13 М при СГПТ, наблюдается частичный эффект нормализации уровня ТТГ в сыворотке крови у гипотиреоидных крыс. Наибольшим протекторным эффектом в отношении вышеуказанных биохимических показателей обладают СМД ХБФ 10-17 М (практически до нормы).
В следующих сериях исследований у крыс с СГПТ происходило повышение содержания уровня ТТГ в сыворотке крови на 553, 9 % по сравнению с их исходными уровнями. После двухнедельного воздействия СМД ХБД 10-13 М у крыс с СГПТ в сыворотке крови отмечалось понижение содержания ТТГ до 145, 9 %, по сравнению с животными с СГПТ, не получавших данной СМД ХБД. В следующей серии исследований у крыс с СГПТ происходило повышение содержания уровня ТТГ в сыворотке крови на 524, 7 % по сравнению с их исходными уровнями. После двухнедельного воздействия СМД ХБД 10-17 М у крыс с СГПТ в сыворотке крови отмечалось: понижение содержания ТТГ до 99, 4 %, по сравнению с животными с СГПТ, не получавших данной СМД ХБД. В данных сериях исследования воздействия СМД ХБД на изменение концентрации ТТГ в сыворотке крови у крыс с СГПТ протекторный эффект данного химического соединения, также как и в случае с ХБФ, наблюдался после действия СМД ХБД 10-17 М, выраженный в повышении содержания показателей ТТГ, практически до их значений у интактных животных.
Диагностика ГПТ, то есть доказательство факта снижения функции ЩЖ, проста, весьма конкретна и доступна. Она подразумевает определение уровня ТТГ и Т4, при этом обнаружение изолированного повышения ТТГ свидетельствует о СГПТ, а одновременное повышение уровня ТТГ и снижение уровня Т4 – о явном или манифестном ГПТ [7, 8]. Значительно большую проблему представляет собой определение показаний для проведения этого исследования, поскольку хорошо известно, что клиническая картина ГПТ крайне неспецифична: даже «явные симптомы» могут не найти подтверждения при гормональном исследовании, наряду с этим, явный ГПТ, сопровождающийся значительным повышением уровня ТТГ, иногда протекает бессимптомно [9, 10].
Итак, результаты данного исследования показали оптимальность применения СМД ХЭА: ХБД и ХБФ при СГПТ у пятнадцатимесячных крыс, что согласуется с нашими предыдущими исследованиями [11, 12].
Библиографический список
- Parrat D., Meyer P. Endocrinology in 2012: what is new? J. Rev. Med. Suisse, 2013, № 9, v. 368, pp. 36 – 39.
- Galofré J. C., Chacón A. M., Latif R. Targeting thyroid diseases with TSH receptor analogs. J. Endocrinol. Nutr. 2013, № 22, v. 13, pp. 47 – 48.
- Klein I. Subclinical Hypothyroidism–Just a High Serum Thyrotropin (TSH) Concentration or Something Else? J. Clin. Endocrinol.Metab. 2013, № 98, v. 2, pp. 508 – 510.
- Топузян В. О. Синтез физиологически активных соединений на основе α, β-дегидроаминокислот и пептидов. Химический журнал Армении, 2007, № 4, т. 60, с. 731 – 748.
- Хачатрян Т. С., Топузян В. О. Особенности изменения концентрации тиреотропного гормона гипофиза и тиреоидных гормонов в крови двухмесячных крыс при гипотиреозе до и после действия холинового эфира N – (2-метоксибензоил) – О – изопропил – α, β – дегидротирозина. Ж. ДАН РА, 2013, т. 113, № 3, с.290 – 294.
- Хачатрян Т. С., Топузян В. О. Роль холинового эфира N – (2-метоксибензоил) – О -изопропил – α, β – дегидротирозина в изменении концентрации тиреотропного гормона гипофиза и тиреоидных гормонов в крови двенадцатимесячных крыс при экспериментальном гипотиреозе. Ж. ДАН РА, 2013, т. 113, № 1, с. 69 – 73.
- Amino N., Ide A., Tamai H. Concept and management of postpartum thyroid dysfunction. J. Nihon Rinsho, 2012, № 70, v.11, pp. 1983 – 1987.
- Bertalan A., Kent M., Glass E. Subclinical hypothyroidism – just a high serum thyrotropin (TSH) concentration or something else? J. Clin. Endocrinol.Metab. 2013, № 2, pp. 508 – 510.
- Bilic-Komarica E., Beciragic A., Junuzovic D. Effects of treatment with L-thyroxin on glucose regulation in patients with subclinical hypothyroidism. J. Med Arh. 2012, № 66, v. 6, pp. 364 – 368.
- Суплотова А. А, Губина В. В, Карнаухова Ю. Б. Скрининг врождённого гипотиреоза как дополнительный метод изучения йод дефицитных заболеваний. Ж. Проблемы эндокринологии, 1998, № 1, т. 44, с. 15 – 19.
- Хачатрян Т. С. Изменение концентрации тиреотропного гормона гипофиза и тиреоидных гормонов в крови у шестимесячных крыс при гипотиреозе. Ж. Биолог. Журн. Армении, 2013, № 1, т. 65, с 89 – 92.
- Авакян А. Э., Топузян В. О., Хачатрян Т. С. Ультрафиолетовое излучение и эфиры холина при манифестном гипотиреозе у крыс Ж. Исследования в области естественных наук. – Май 2014. – № 5 [Электронный ресурс]. URL: http://science.snauka.ru/2014/05/6772.