УДК 616-036.22:616

ГЕПАТИТ В. БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ

Лутчин Ирина Андреевна
Национальный университет пищевых технологий

Аннотация
Гепатит В – одно из самых распространенных вирусных заболеваний современного мира, стоит в одном ряду вместе с раковыми заболеваниями и СПИДом. О распространении вируса свидетельствует наличие в крови людей поверхностного антигена вируса гепатита В (HВsAg), что является основным компонентом данного возбудителя, и на основе которого производятся профилактические препараты – вакцины.
Первая вакцина была создана в 1971 г. на основе крови хронических носителей, которая содержала HВsAg. Разработка методов очистки поверхностного антигена вируса гепатита В стала предпосылкой для создания в начале 80-х годов так называемых «плазменных» вакцин. Однако такие вакцины являются достаточно опасными и имеют ряд недостатков. Поэтому на смену им пришли рекомбинантные вакцины, изготовление которых базируется на ДНК-технологиях. Новые препараты начали широко применять для профилактики гепатита В, что значительно сократило количество HВsAg-носителей. Такие вакцины являются безопасными для использования, так как не содержат составляющих крови, из-за которой существует риск заражения другими патогенами. Генно-инженерные вакцины получают культивированием рекомбинантных дрожжей, в клетках которых синтезируется поверхностный белок. Перспективным продуцентом для получения HВsAg, а впоследствии и для создания на его основе вакцины, являются метилотрофные дрожжи Pichia pastoris, которые характеризуются высоким уровнем продукции HВs-белка по сравнению с дрожжами Saccharomyces cerevisiae.

Ключевые слова: гепатит В, ДНК-технологии, рекомбинантная вакцина


HEPATITIS B. BIOTECHNOLOGY METHODS OF TREATMENT

Lutchyn Iryna Andreevna
National University of Food Technologies

Abstract
Hepatitis B is one of the most common viral diseases of the modern world, is on a par with cancer and AIDS. About the spread of the virus indicates the presence in the blood of the people of the surface antigen of hepatitis В virus (HВsAg), which is the main component of this pathogen, and on the basis of which are preventive drugs – vaccines. The first vaccine was created in 1971 on the basis of the blood of chronic carriers containing HВsAg. Development of methods of cleaning the surface antigen of hepatitis B virus has become a prerequisite for the creation in the early 80 th of XX century the so-called «plasma» vaccines. However, such vaccines are very dangerous and have several disadvantages. Therefore, they were replaced by recombinant vaccines, the production of which is based on DNA technology. The newly created drugs have been widely used for the prevention of hepatitis В, which significantly reduced the number HВsAg-carriers. Such vaccines are safe to use because it does not contain blood components, through which there is a risk of contamination with other pathogens. Genetically engineered vaccines are produced by culturing the recombinant yeast cells which synthesized surface protein. The most promising producer to obtain HВsAg, and subsequently to create on its basis the vaccine, there methylotrophs yeast Pichia pastoris, which are characterized by high level of production HВs-protein compared with the yeast Saccharomyces cerevisiae.

Keywords: DNA technology, hepatitis В, HВsAg, Pichia pastoris., recombinant vaccine


Рубрика: Общая рубрика

Библиографическая ссылка на статью:
Лутчин И.А. Гепатит В. Биотехнологические методы лечения // Исследования в области естественных наук. 2015. № 4 [Электронный ресурс]. URL: http://science.snauka.ru/2015/04/9879 (дата обращения: 29.04.2017).

Распространение гепатита В в мире

По разным данным в мире насчитывается около 400 млн человек, которые являются носителями вируса гепатита В (ГВ). Такая цифра в 10 раз превышает количество инфицированных вирусом иммунодефицита человека [1, 6]. Критерием оценки распространения данного заболевания считают частоту выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (hepatitis B surface antigen – HBsAg) среди здорового населения (табл.1). Примерно 45% всего населения земного шара (Китай, Тайвань, тропическая Африка) проживает в регионах с высоким уровнем ГВ-инфекции, 43% – в регионах со средним уровнем распространения заболевания (Юго-Восточная Азия, Россия, Украина) и 12% – на территориях с низким уровнем (Австралия, Центральная Европа, США, Канада) [1, 3, 12, 13].

Таблица 1. Распространение гепатита В в мире

Регион

Количество HBsAg-носителей в данном регионе,%

Уровень заболеваемости (количество больных,%)

Китай,

До 20

Высокий

(45)

Тайвань

Тропическая Африка

20 – 50

Юго-восточная Азия

2 – 7

Средний

(43)

Россия

5

Украина

2 – 7

Австралия

< 2

Низкий

(12)

Центральная Європа

США

Канада

Характеристика возбудителя вирусного заболевания

Гепатит В – это заболевание, вызванное вирусом гепатита В (ВГВ), который поражает печень, вызывая воспаление, а в дальнейшем – цирроз и рак печени (гепатокарценома). Вирус относится к семейству Hepadnaviridae, рода Orthohepadnavirus. Это сложноорганизованный ДНК-содержащий вирус сферической формы, диаметр которого составляет 40 – 48 нм (в среднем 42 нм). Состоит из двойной фосфолипидной оболочки толщиной 7 нм и нуклеокапсида (ядро), имеющий форму икосаэдра диаметром 28 нм. Структура оболочки представлена поверхностным антигеном (HBsAg), состоящий из нескольких сотен молекул белка, глико- и липопротеидов. В ядре вируса находится ядерный антиген (HBcAg), конечный белок HBeAg и ДНК-полимераза. Геном вируса представляет собой частично двухцепочечную ДНК незамкнутой кольцевой формы. Цепь («-» ДНК) составляет около 3220 пар нуклеотидов, короткий («+» ДНК) – 1700 – 2800. Полноценная "-" ДНК – цепь ковалентно связана с ДНК-полимеразой, которая достраивает плюс-цепь [1, 8, 9, 12, 13].

В последние годы было идентифицировано гены ВГВ, кодирующие синтез соответствующих им белков. Ген, кодирующий синтез поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) состоит из трех частей: pre-Sl, pre-S2 и S; ген, кодирующий синтез основного белка нуклеокапсида (HBcAg) состоит из двух частей: С и pre-С. Фермент ДНК-полимераза (способна функционировать как обратная транскриптаза) кодирует Р-ген. Х-ген несет информацию о Х-белке, который не участвует в репликации вируса, однако способен регулировать процессы гепатоканцерогенеза [12, 13].

Вирус гепатита В высокоустойчив к физическим и химическим факторам. Сохраняет жизнеспособность в сыворотке крови при комнатной температуре в течение 3 месяцев, в сыворотке плазмы – до 25 лет. Резистентный ко многим средствам и консервантам крови. Вирус инактивируется при автоклавировании (45 мин) и стерилизации сухим жаром (160 °С), чувствителен к эфиру и неионных детергентов. Для химической дезинфекции используют в основном альдегиды и соединения хлора [13].

Репликация вируса в организме человека и формирование иммунного ответа

Вирус проникает в клетки печени благодаря наличию на их поверхности специфических рецепторов. После разрушения внешних оболочек высвобождается внутренний компонент, имеющаяся в его составе вирусная ДНК-полимераза достраивает «недостающий» участок «+» цепи ДНК. Инфекция может протекать по одному из двух механизмов: продуктивном и интегративном. В случае продуктивного типа происходит транскрипция ДНК, образование информационной рибонуклеиновой кислоты (и-РНК), синтез вирусных белков. Репликация ДНК происходит по уныкальному механызму с использованием как матрицы не ДНК, а РНК. Цикл репродукции заканчивается сборкой вирусных частиц в цитоплазме гепатоцитов [13]. При интегративной инфекции (хронический тип заболевания) после достройки второй нити ДНК происходит интеграция ДНК с клеточным геномом вблизи сильного промотора. В этом случае клетка начинает в большом количестве производить HBs-антиген. HBsAg синтезируется в цитоплазме гепатоцитов в избытке. Итак, в результате репродукции компонентов ВГВ в сыворотке крови больного человека скапливается именно частицы HBsAg, а не полноценные вирионы. В среднем на одну вирусную часть приходится от 1000 до 1000000 сферических HBsAg. Другая часть молекулы HBsAg представлена в виде трубочек, которые накапливаются в эндоплазматической сети клетки [9, 13].

При заражении ВГВ в организме вырабатываются антитела против трех антигенных детерминант: анти-HBs-антитела к поверхностному антигену, анти-НВс-антитела к ядерному антигену и анти-HBe-антитела к е-антигену [9, 12, 13].

Открытие HBsAg и первые вакцины против гепатита В

Первый зарегистрированный случай эпидемии, вызванной вирусом гепатита B, был описан Лурманом в 1885 [14]. Основным «компонентом» ВГВ является поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg), что собственно и вызывает иммунный ответ в организме больного и играет ключевую роль в диагностике и изучении этиологии, патогенеза, клиники и профилактики гепатита В [1, 13]. Этот маркер и антитела к нему были открыты еще в 1965 году Бламбергом при изучении полиморфизма сывороточных белков в австралийских аборигенов, больных гемофилией (именно поэтому одно из названий HBsAg – «австралийский» антиген) [15]. Обнаружена «антиген - антительная система» была ассоциирована с гепатитом, который возник после переливания крови. В1970 г. Дейн при электронной микроскопии сывороток пациентов, больных гепатитом В также обнаружил маленькие частицы диаметром 20 нм, которые впоследствии назвали частицами Дейна [5, 15].

Через восемь лет после открытия HBsAg были предприняты первые попытки получения вакцины против гепатита В. В1971 г. Кругман с соавт. [2] обнаружили, что кровь хронических носителей, прогрета в течение 1 мин на водяной бане, способна защищать от инфекции. Затем было установлено, что у людей, которых вакцинировали данным «препаратом», создавались антитела к вирусному заболеванию [2].

Следующим этапом создания вакцины против гепатита В стал препарат на основе высокоочищенного HBsAg. В качестве источника антигена использовали плазму крови носителей HBsAg. Вследствие этого такие вакцины стали называть «плазменными» вакцинами. В начале 80-х годов ученые из разных стран мира (США, Франция и др.) разработали схемы очистки данного антигена [5]. Подобная «плазменная» вакцина против гепатита В была разработана в России в середине 80-х годов сотрудниками Института вирусологии им. Д.И. Ивановсьокого Российской академии медицинских наук (РАМН) под руководством В.А. Ананева и В.М. Жданова [4]. Такая вакцина прошла определенные испытания, оказалась эффективной и безопасной, однако широко не используется [4, 5].

Отметим, что «плазменными» вакцинами прививали много людей, при этом ни одного случая заражения не было зарегистрировано. Но, учитывая, что в качестве сырья для производства вакцины использовали известный инфекционный материал (кровь больного), существовали определенные опасения, ведь кровь может содержать патогены других заболеваний (например, ВИЧ), что в свою очередь может привести к заражению во время прививок [2, 4, 18]. И хотя такие вакцины все еще применяются в некоторых странах мира (Индонезия, Вьетнам, Иран, Мианма и др.), их использование постепенно прекращается, ведь способы получения вакцины из плазмы крови требуют больших затрат и очень трудоемки [2, 18].

Для лечения хронического гепатита В раньше использовались синтетические аналоги нуклеозидов (видарабин) [5]. Но такие препараты вызывали побочные эффекты (прежде всего, гепатотоксичность), поэтому интерес к ним резко снизился. В конце 80-х годов начали проводить исследования о влиянии на ВГВ интерферонов (человеческий лейкоцитарный интерферон) [5], и результаты показали значительное увеличение иммунокомпетентных клеток к данному вирусу. Современными препаратами для лечения хронического гепатита В является α-интерферон (α-ИФН) и ламивудин (аналог нуклеозидов). Кроме этих препаратов, начинают использовать нуклеозидные аналоги: энтекавир, фамцикловир и адефовир (аналог нуклеотидов), которым присуща высокая противовирусная активность [5].

ДНК-технологии. Создание рекомбинантных вакцин

Определяющим этапом создания вакцины против гепатита В было внедрение ДНК-технологий [10, 11]. Современные генно-инженерные вакцины против гепатита В на основе технологии рекомбинантной ДНК были разработаны в начале 80-х годов и применяются с1985 г. [11]. Данная вакцина относится к субъединичным вакцинам. Основным ее компонентом является поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg). Преимуществом вакцины есть полное отсутствие продуктов крови в цикле производства, низкое содержание балластных веществ, стабильность, точно измеряемое количество активного компонента, полная безопасность и высокая иммуногенность [8, 10, 11]. Однако в некоторых случаях при иммунизации людей обычной рекомбинантной вакциной против гепатита В, даже после повторной вакцинации, не производятся циркулирующие антитела. Для предотвращения этого были разработаны новейшие технологии. ДНК-вакцины против гепатита В вводили в липосомы, или смешивали с интерлейкином-2. Такие методы позволили преодолеть нежелательный результат у вакцинированных [8].

Для предотвращения заболевания ВГВ существует общая профилактика населения, состоящая из неспецифических и специфических методов [12]. Неспецифические методы зависят в основном от поведения людей в обществе (использование средств защиты при половых отношениях; одноразовые медицинские инструменты для инъекций; переливания крови с соблюдением всех требований и др.). Что касается специфики – это иммунопрофилактика населения, то есть использование рекомбинантных вакцин против гепатита В [12]. Такие вакцины служат и одновременной профилактикой онкологических заболеваний, поскольку вирусное заболевание гепатитом В тесно связано с первичным раком печени. С помощью вакцинации удается снизить заболеваемость гепатитом В в 30 раз [8].

Особенности создания генно-инженерных вакцин

Как рекомбинантные микроорганизмы для получения вакцины против гепатита В используют в основном дрожжи Saccharomyces cerevisiae, Нansenula polymorpha и Pichia pastoris [7, 16-19]. Получение рекомбинантной вакцины включает следующие этапы: с молекулы ДНК вируса гепатита В вырезают ген S, ответственный за синтез поверхностного антигенц вируса гепатита В; этот ген встраивают в плазмиду и вводят ее в клетки дрожжей; в результате дрожжи начинают синтезировать частицы HBsAg; после очистки от балластных белков антиген адсорбируют на гидроксиде алюминия и инактивируют [8, 10, 11, 16, 17, 19]. Обобщающая характеристика технологических особенностей получения поверхностного антигена вируса гепатита В с использованием различных продуцентов приведена в табл. 2 [16, 17, 19].

Таблица 2. Особенности получения поверхностного антигена вируса гепатита В с помощью P. pastoris PS103 (pHBS), S. cerevisiae №965 (ГКВ) и S. cerevisiae ДАН-041 / р ЕS20

Биологический агент

Состав питательной среды, г/л

Продолжительность культивирования, ч

Концентрация HBs белка, мг/л

Особенности процесса биосинтеза,

Выделение целевого продукта

P. pastoris PS103(pHBS)

Среда №1: пептон - 20,0; дрожжевой экстракт - 10,0; глицерин - 10,0 см³; 1М калий-фосфатный буфер - 100 см³; Yeast Nitrogen Base («Difco», США) - 13,4.

Среда №2: пептон - 20,0; дрожжевой экстракт - 10,0; метанол - 5,0 см³; 1М калий-фосфатный буфер - 100 см³; Yeast Nitrogen Base («Difco», США) - 13,4.

144

30  – 40

 

Двухстадийный способ культивирования. Среду №1 используют для накопления биомассы, среду №2 - для индукции синтеза HBs белка. По окончании индукции клетки дрожжей центрифугируют, суспендируют в равном объеме буфера (50 мМNa-фосфатный буфер рН 8,0,5 мМЭДТА,2 мМPMSF, 0,5% Твин-20), добавляют стеклянные шарики (0,1 мм) и разрушают на дезинтеграторе «Dyno-Mill» в течение 10 минут, затем центрифугируют 10 мин при 3000 об / мин, для удаления неповрежденных клеток. В супернатанте определяют HBsAg иммуноферментным методом

S. cerevisiae №965

           

Среда №1: неорганический фосфор - 1; MgSO4 - 0,5; KCl - 1,0; NaCl - 0,1; CaCl2 - 0,1; L-аспарагин - 2,0; Д-глюкоза - 20,0; аланин - 5 ∙ 10-4; биотин, тиамин, рибофлавин, пиридоксин, никотиновая кислота, пантотенат кальция, ПАБК - по 2 ∙ 10-4.

Среда №2  такого же состава как среда №1, но содержание неорганического фосфора - 0,03.

24

Титр РНГА – 1/256000 Двухстадийный способ культивирования. Среду №1 Hpi используют для накопления биомассы, среду №2 Lpi (с низким содержанием

неорганического фосфора) - для синтеза HBs белка.

Более сложный процесс выделения целевого продукта.

S. cerevisiae ДАН-041/р ЕS20

Среда №1: пептон из кислого гидролизата казеина (неорганический фосфор 0,5 - 0,6 мг / г) - 30,0; дрожжевой экстракт (неорганический фосфор 2,0 - 2,5 мг / г) - 10,0; глюкоза - 20,0; КСl 1,0; NaCl - 0,1; СаСl2 (безводный) - 0,2; MgSO4 ∙ 7H2O - 1,0; (NH4) 2SO4 - 5,0; раствор микроэлементов (КІ - 0,1, Н3ВО3 - 0,01, MnSO4 - 0,01, (NH4) 2MoO4 - 0,01, FeSO4 - 0,05) - 0,5 мл / л; раствор витаминов (тиамин хлорид - 0,2; пиридоксин - 0,2; рибофлавин (мононуклеотид) - 0,2; пантотенат кальция - 0,2, никотиновая кислота - 0,2; параминобензойна кислота - 0,2; биотин - 0,002, инозитол - 10,0) -1 мл / л; неорганический фосфор - 0,04 - 0,042 мг / г.

Среда №2 такого же состава как среда №1, но содержание пептона из кислого гидролизата казеина (неорганический фосфор 0,5 - 0,6 мг / г) -15,0 г / л и неорганический фосфор - 0,005 - 0,006 мг / г.

42

5

Двухстадийный процесс биосинтеза. Среду №1 используют для накопления биомассы, среду №2 - для индукции синтеза HBs белка. Биомассу отделяют центрифугированием, трижды промывают от остатков культуральной жидкости буфером К (0,05 MNa2CO3 / NaHCO3 (рН 9,0),0,15 МNaCl,10 мМЭДТА,0,2 мМфенилметилсульфонилфторид, 0,3 мас.% Твин - 20) с последующим центрифугированием. Биомассу суспендируют в буфере К и осуществляют дезинтеграцию клеток на гомогенизаторе Gaulin APV. После центрифугирования (для удаления обломков клеток) в гомогенизате определяют содержание целевого полипептида НВsAg стандартным иммуноферментным методом.                                                                                                                                                             

Из данных, приведенных в табл. 2, видно, что для всех штаммов используют двухстадийное культивирования. Первая стадия служит для накопления биомассы, вторая – для индукции синтеза поверхностного антигена вируса гепатита В.

Самый высокий показатель синтеза целевого продукта (белок HBs) – 30 – 40 мг / л, достигается при культивировании метилотрофных дрожжей P. pastoris PS103 (pHBS), самый низкий – при S. cerevisiae ДАН - 041 / р ЕS20 (5 мг / л). Количество целевого продукта в S. cerevisiae №965 измеряется в титрах РНГА (реакции непрямой гемагглютинации). Данный показатель невозможно перевести в мг продукта на литр культуральной жидкости [16, 17, 19].

Продолжительность культивирования метилотрофных дрожжей P. pastoris PS103 (pHBS) составляет 144 ч, а с использованием S. cerevisiae ДАН-041 / р ЕS20 – 42 ч. При сравнении стоимости питательных сред для выращивания продуцентов было установлено, что среда для культивирования S. cerevisiae ДАН-041 / р ЕS20 почти в два раза дешевле, чем среда для культивирования P. pastoris PS103 (pHBS), однако концентрация целевого продукта в P. pastoris PS103 (pHBS) выше (30 – 40 мг / л), а условная стоимость 1 мг HBsAg ниже (около 5,66 грн / мг). Производительность биосинтеза HBs белка у дрожжей P. pastoris PS103 (pHBS) более чем в два раза выша по сравнению с S. cerevisiae ДАН-041 / р ЕS20 (0,28 и 0,11 мг / ч соответственно). Поэтому большинство производителей рекомбинантной вакцины против гепатита В качестве продуцента HBs белка выбирают метилотрофные дрожжи P. рastoris [17, 19].

После процессов выделения HBs белка из клеток дрожжей P. рastoris (см. табл. 2) [17] осуществляют очистку поверхностного антигена вируса гепатита В. Для осаждения балласта используют полиэтиленгликоль, который добавляют при Т 2-8˚С и выдерживают 16-24 ч, чтобы сформировался осадок. Затем осадок отделяют, надосадочную жидкость с HBsAg обрабатывают адсорбентом, в который сорбируется антиген. Адсорбент отделяют центрифугированием, промывают солевым раствором (происходит десорбция). Каждый производитель по своему усмотрению выбирает адсорбент (например, аэросил) [7, 20].

Раствор, содержащий антиген подвергают ионообменной хроматографии, ультрафильтрации (для концентрирования), градиентному центрифугированию, молекулярно-распределительной хроматографии, затем обрабатывают формалином (Т 37˚С, продолжительность 72-96 ч). Для удаления свободного формалина осуществляют ультрафильтрацию с последующей стерилизующей фильтрацией через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм. Далее концентрированный раствор контролируют в соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения: проводят определение липидов (от 30 до 100 мкг на 100 мкг белка), полисахаридов (не более 10 мкг на 100 мкг белка), ДНК (не более 250 пг на 100 мкг белка), формалина (менее 0,01%), белка (150-250 мкг / мл), стерильности (отсутствие роста бактерий и грибов), иммуноферментный анализ (ИФА) [7, 20].

Если препарат соответствует всем вышеуказанным требованиям, очищенный материал разводят фосфатным буфером и стерилизуют с использованием мембран с диаметром пор 0,22 мкм. К полученному раствору добавляют стерильную суспензию гидроксида алюминия в фосфатном буфере. Адсорбцию проводят при комнатной температуре в течение 2 ч К суспензии добавляют стерильный раствор мертиолята до конечной концентрации 0,01% [7].

Современные рекомбинантные вакцины против гепатита В состоят всего из одного антигена – HBsAg. Поскольку антиген является поверхностным, то есть оказывается на поверхности вируса гепатита В, сформированы вакциной антитела к нему, будут способны легко атаковать и обезвреживать вирус при его попадании в организм [21].

Вторым неспецифическим, но важным компонентом вакцин является гидроксид алюминия. Это вещество является в вакцинах так называемым адъювантом, который усиливает иммунную и воспалительную реакцию в месте введения вакцин. Необходимость его использования в том, что как правило, вакцины на основе только одного антигена слабоимуногенни и для достижения необходимого уровня формирования антител нужно или введения большего количества антигена, или усиление реакции на него. Поскольку увеличение количества антигена повышает риск аллергических реакций, было решено использовать вместо этого инертный «усилитель» [21].

В большинстве случаев вакцины содержат и минимальное количество консерванта (тиомерсал). С одной стороны, он «предохраняет» вакцину от бактериального загрязнения, с другой – как бы фиксирует препарат в его первоначальном состоянии, не позволяя антигену изменить свои химические свойства (и при этом не потерять свою эффективность) [21].

Выводы. Итак, в настоящее время достижения биотехнологии позволили разработать эффективную и безопасную вакцину для профилактики гепатита В. Можно надеяться, что с дальнейшим развитием биотехнологии мир навсегда забудет о такой болезни как вирусный гепатит.


Библиографический список
  1. Абдурахманов Д. Т. Хронический вирусный гепатит: пособиедля врачей 1. – М.: 4ТЕ Арт, 2011. – 32 с.
  2. Бектемиров Т.А. Успехи и проблемы вакцинопрофилактики гепатита В в мире // Вакцинация. – 2001. – № 3. – С. 4–5.
  3. Белов В.C. Руководство для организаторов, и сведениядля медицинских работников и родителей. Внедрение вакцинации против вирусного гепатита В в национальные программы иммунизации. М.: Минздрав, 2007. – 59 с.
  4. Жданов В.М., Ананьев В.А., Стаханова В.М. Вирусные гепатиты. – М.: Медицина, 1986. – 256 с.
  5. Жданов К.В., Козлов К.В., Сукачев В.С. Эволюция противовирусной терапии хронических гепатитов В, С и D // Журн. Инфектологии. – 2009. – Т 1. –  № 4. – С. 23-35.
  6. Ковальчук  А. Ю.    Характеристика социально - демографической ситуации и социально значимых заболеваний в Украине // Украинский медицинский журнал. – 2014. – № 1. – С. 29–33.
  7. Краснопольський Ю.М., Борщевська М.И. Биотехнология иммунобиологических препаратов. – Х.: Изд-во «Фармитэк», 2008. – 312 с.
  8. Медуницын Н.В., Покровский В.И. Основы иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных болезней: Учеб. пособие. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. – 512 с.
  9. Перетрухина А.Т., Блинова Е.И. Бактерийные и вирусные препараты. – М.: Академия Естествознания, 2010. – 241 с.
  10. Петров Р.В., Хаитов P.M. Иммуногены и вакцины нового поколения. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. – 608 с.
  11. Пирог Т.П., Ігнатова О.А. Общая биотехнология. – К.: НУПТ, 2009. –  336 с.
  12. Семенов В. М. Руководство по инфекционным болезням – М.: МИА, 2008. – 745 с.
  13. Ющук Н. Д., Климова Е. А., Знойко О. О. и др. Вирусные гепатиты: клиника, диагностика, лечение  – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2014. – 160 с.
  14. Lurman A. Eine icterus epidemic // Berl Klin Woschenschr. 1885. – V. 22. – P. 20–23.
  15. Blumberg B.S. A «new» antigen in leukemia sera // JAMA. 1965. – V. 191. – N 7. – P. 541–546.
  16. Пат. № 2182927 РФ, МПК7 C12N1/19, A61K39/29, C12N1/19, C12R1:865. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae 965 (ГКВ) – продуцент поверхностного антигена вируса гепатита В. / Л.А. Нестеров, Н.П. Дивова, М.А. Грива и др. – Опубл. 27.05.2002.
  17. Пат. № 2201452 РФ, МПК7 C12N15/51, C12N15/64, A61K39/29, C12N1/19, C12R1:84. Рекомбинантная плазмидная ДНК рHBS, обеспечивающая биосинтез поверхностного антигена вируса гепатита B, способ конструирования плазмиды, штамм дрожжей Рichia pastoris ps103 (pHBS) – продуцент указанного антигена / М.В. Падкина, Л.В. Парфенова, Е.В. Самбук, М.Н. Смирнов. – Опубл. 27.03.2003.
  18. Пат. № 2205023 РФ, МПК7 C07K14/02, A61K39/29. Способ получения поверхностного антигена вируса гепатита В из рекомбинантных клеток дрожжей Нansenula polymorpha и вакцина для иммунизации против гепатита В. / Ю.С. Лебедин, Т.В. Тимофеева, А.В. Сучков. – Опубл. 27.05.2003.
  19. Пат. № 2088664 РФ, МПК7  C12N15/51, C12N1/19, A61K39/29.  Рекомбинантная плазмидная ДНК рDES20, кодирующая поверхностний антиген вируса гепатита В (НВsAg/ayw), штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae, содержащий рекомбинантную плазмидную ДНК рDES20 – продуцент поверхностного антигена вируса гепатита В (НВsAg/ayw). / В.Л. Друца,  М.В. Буданов,  В.Н., Борисова,  И.М. Яковлева  – Опубл. 27.08.1997.
  20. Pat. 8624004 US C12P21/02, C12N15/00. Purification of HBV antigens for use in a vaccines / De-Heyder K., Schu P., Serantoni M. – Publ. 07.01.2014.
  21. Вирусный гепатит В [Электронный ресурс] // Режим доступа: http://mdovidka.com/virusnij-gepatit-b.html.


Все статьи автора «Lut.iryna»


© Если вы обнаружили нарушение авторских или смежных прав, пожалуйста, незамедлительно сообщите нам об этом по электронной почте или через форму обратной связи.

Связь с автором (комментарии/рецензии к статье)

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться, чтобы оставить комментарий.

Если Вы еще не зарегистрированы на сайте, то Вам необходимо зарегистрироваться: